Μετασχηματισμός έναντι διαμόλυνση | Διαφορά μετασχηματισμού και μεταμόσχευσης

Μετασχηματισμός έναντι διαμόλυνσης

Ο μετασχηματισμός και η διαμόλυνση είναι δύο απλές τεχνικές που χρησιμοποιούνται για την εισαγωγή ενός ξένου γονιδίου σε ένα κύτταρο ξενιστή. Ωστόσο, αυτές οι τεχνικές εξαρτώνται από τον τύπο του συστήματος ξενιστή ή φορέα.

Τι είναι η μετατροπή κυττάρων;

Ο μετασχηματισμός είναι η τεχνική που χρησιμοποιείται για την εισαγωγή γονιδίων σε ζυμομύκητα και βακτηριακά κύτταρα. Αυτή η τεχνική συνήθως προκαλεί κληρονομικές αλλαγές στα γονίδια και έτσι η έκφραση του γονιδίου είναι μόνιμη. Ο βακτηριακός μετασχηματισμός εισήχθη για πρώτη φορά το 1928 από τον Frederick Griffith. Στη συνέχεια, στις αρχές της δεκαετίας του 1970, αυτή η τεχνική χρησιμοποιήθηκε στο

Ε. coli. Κατά τη διάρκεια της διαδικασίας μετασχηματισμού Ε. coli, τα κύτταρα εμποτίζονται σε παγωμένο διάλυμα CaCl 2 _{. Αυτό το βήμα κάνει} Ε. coli κύτταρα. Μετά από αυτό, τα ικανά κύτταρα αναμιγνύονται με το πλασμιδικό ϋΝΑ και επωάζονται επί πάγου επί 20-30 λεπτά. Στη συνέχεια δίνεται μια σύντομη θερμική καταπληξία προκειμένου να καταστεί δυνατή η μεταφορά του DNA στο κύτταρο. Τέλος, τα κύτταρα τοποθετούνται σε θρεπτικό ζωμό και επωάζονται στους 37 ° C για 60-90 λεπτά προκειμένου να δημιουργηθούν τα πλασμίδια. Μόλις ολοκληρωθούν αυτές οι βαθμίδες, τα μετασχηματισμένα κύτταρα μπορούν να τοποθετηθούν σε ένα κατάλληλο μέσο για τη διάδοση των κυττάρων. Δεδομένου ότι ο μετασχηματισμός θεωρείται ως μια αναποτελεσματική τεχνική, δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την παρασκευή τραπεζών κλώνων.

Τι είναι η κυτταρική διαμόλυνση;

Η διαμόλυνση είναι μια μέθοδος εισαγωγής ενός ξένου γονιδίου, συνήθως, σε κύτταρα θηλαστικών. Υπάρχουν δύο μέθοδοι διαμόλυνσης. δηλαδή, παροδική διαμόλυνση και σταθερή επιμόλυνση. Σε παροδική διαμόλυνση, η έκφραση γονιδίου είναι διαθέσιμη για περιορισμένο χρονικό διάστημα. Έτσι, η αλλοίωση του γονιδίου προκαλεί προσωρινή έκφραση. Αυτή η μέθοδος επιμόλυνσης είναι απλή και γρήγορη. Ως εκ τούτου, μπορεί να χρησιμοποιηθεί συστηματικά. Ένα μειονέκτημα της παροδικής μορφομετατροπής είναι η δυσκολία εφαρμογής σε μεγάλης κλίμακας συστήματα πρωτεϊνικής σύνθεσης.

Κατά τη διάρκεια της σταθερής μορφομετατροπής, ένα γονίδιο στόχος είναι ενσωματωμένο στο γονιδίωμα του κυττάρου-ξενιστή και έτσι η γονιδιακή έκφραση είναι μόνιμη, σε αντίθεση με την παροδική επιμόλυνση.

Ποια είναι η διαφορά μεταξύ μετασχηματισμού και μεταμόσχευσης;

• Ο μετασχηματισμός είναι η εισαγωγή ενός γονιδίου σε ένα προκαρυωτικό κύτταρο (βακτηριακό και ζυμομύκητα), ενώ η επιμόλυνση συνήθως ονομάζεται εισαγωγή ενός γονιδίου σε κύτταρο θηλαστικού.

Το μετασχηματισμό έχει ως αποτέλεσμα κληρονομικές αλλοιώσεις στα γονίδια, ενώ η διαμόλυνση μπορεί να οδηγήσει σε προσωρινή έκφραση ή μόνιμες αλλαγές στα γονίδια.