Διαφορά μεταξύ Maxam Gilbert και Sanger Sequencing | Maxam Gilbert εναντίον Sanger Sequencing
Βασικές διαφορές - Maxam Gilbert vs Sanger Sequencing
Τα νουκλεοτίδια είναι οι βασικές δομικές μονάδες και δομικές μονάδες του DNA. Το μόριο ϋΝΑ αποτελείται από πολυνουκλεοτιδική αλυσίδα. Υπάρχουν τέσσερα διαφορετικά νουκλεοτίδια στο DNA. Αυτά τα νουκλεοτίδια αποτελούνται από τέσσερις διαφορετικές αζωτούχες βάσεις ονομαζόμενες Α (αδενίνη), G (γουανίνη), C (κυτοσίνη), Τ (θυμίνη). Η σειρά των νουκλεοτιδίων στο μόριο ϋΝΑ έχει μεγάλη σημασία καθώς κωδικοποιεί μια σημαντική γενετική πληροφορία για την ανάπτυξη και την ανάπτυξη οργανισμών. Η αλληλούχιση του DNA αναφέρεται στη διαδικασία που καθορίζει την ακριβή αλληλουχία νουκλεοτιδίων του ϋΝΑ. Υπάρχουν διαφορετικές μέθοδοι προσδιορισμού αλληλουχίας του DNA. Η αλληλούχιση του Maxam Gilbert και η αλληλούχιση DNA του Sanger είναι δύο μέθοδοι αλληλούχισης του DNA που ανήκουν στην αλληλουχία πρώτης γενεάς. Η διαδικασία προσδιορισμού αλληλουχίας Maxam Gilbert προσδιορίζει την αλληλουχία βάσης δια χημικής διάσπασης των θραυσμάτων DNA επισημασμένων με άκρο 5 'κατά προτίμηση σε κάθε ένα από τα τέσσερα νουκλεοτίδια και ηλεκτροφόρηση πηκτής. Η διαδικασία προσδιορισμού αλληλουχίας Sanger καθορίζει την αλληλουχία νουκλεοτιδίων με σύνθεση μονόκλωνου ϋΝΑ χρησιμοποιώντας ϋΝΑ πολυμεράση και διδεοξυνουκλεοτίδια και ηλεκτροφόρηση πηκτής. Αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ του Maxam Gilbert και του Sanger Sequencing.
ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΑ
1. Επισκόπηση και διαφορά κλειδιού
2. Τι είναι ο Maxam Gilbert
3. Τι είναι η Sanger Sequencing
4. Σύγκριση μεταξύ τους - Maxam Gilbert vs Sanger Sequencing
5. Περίληψη
Τι είναι ο Maxam Gilbert Sequencing;
Η αλληλούχιση Maxam Gilbert, επίσης γνωστή ως μέθοδος χημικής προσδιορισμού αλληλουχίας , είναι μια τεχνική που αναπτύχθηκε για να προσδιορίσει τη σειρά των νουκλεοτιδίων στο DNA. Αυτή η μέθοδος εισήχθη από τους Walter Gilbert και Alan Maxam το 1976 και έγινε δημοφιλής αφού μπορεί να εκτελεστεί απευθείας με καθαρισμένο DNA. Η μέθοδος Maxam Gilbert ανήκει στην πρώτη γενιά της αλληλουχίας του DNA και ήταν η πρώτη μέθοδος προσδιορισμού αλληλουχίας που χρησιμοποιείται ευρέως από τους επιστήμονες.
Η βασική αρχή αυτής της μεθόδου έγκειται στον περιορισμό των τελικών σημασμένων θραυσμάτων DNA σε συγκεκριμένες βάσεις με χημικές ουσίες και συνθήκες ειδικού για τη βάση και στον διαχωρισμό των επισημασμένων θραυσμάτων με ηλεκτροφόρηση, όπως φαίνεται στο σχήμα 01. Τα θραύσματα διαχωρίζονται σύμφωνα με τα μεγέθη τους στο πήκτωμα. Δεδομένου ότι τα θραύσματα είναι επισημασμένα, η αλληλουχία του μορίου ϋΝΑ μπορεί εύκολα να συναχθεί.Η μέθοδος Maxam gilbert χρησιμοποιεί χημικές ουσίες βάσης για να σπάσει το DNA σε συγκεκριμένες βάσεις. Δύο κοινές χημικές ουσίες που ονομάζονται θειικό διμεθύλιο και χημικές ουσίες υδραζίνης χρησιμοποιούνται για την επιλεκτική προσβολή των πουρινών και των πυριμιδινών, αντίστοιχα.
Καθαρισμός της αλληλουχίας DNA χρησιμοποιώντας ενδονουκλεάσες περιορισμού
- Επισήμανση των άκρων των θραυσμάτων DNA με την προσθήκη ραδιενεργών φωσφορικών
- Καθαρισμός των σημασμένων θραυσμάτων από μη επισημασμένα θραύσματα με ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα
- Διαχωρισμός του τελικού- επισημασμένου ϋΝΑ σε τέσσερις σωλήνες και κατεργασία με ειδικές χημικές ουσίες ξεχωριστά
- Ηλεκτροφόρηση του περιεχομένου κάθε σωλήνα σε ξεχωριστές γραμμές σε γέλη και διαχωρισμό θραυσμάτων ανάλογα με το μήκος τους.
- Ανίχνευση των θραυσμάτων με αυτοραδιογραφία.
- Εικόνα 01: Maxam Gilbert Sequencing
Τι είναι το Sanger Sequencing;
Το Sanger Sequencing είναι μια μέθοδος προσδιορισμού αλληλουχίας που αναπτύχθηκε από τον Frederick Sanger και τους συναδέλφους του το 1977 για να προσδιορίσει την αλληλουχία βάσης ενός δεδομένου θραύσματος DNA. Είναι επίσης γνωστή ως
αλληλουχία τερματισμού αλυσίδας ή μέθοδος προσδιορισμού αλληλουχίας διδεοξυ. Αυτή η μέθοδος δουλεύει με την αρχή της εκλεκτικής ενσωμάτωσης διδεοξυνουκλεοτιδίων τερματισμού αλυσίδας (ddNTPs) όπως ddGTP, ddCTP, ddATP και ddTTP με DNA πολυμεράση κατά τη διάρκεια της σύνθεσης μονόκλωνου DNA για τον τερματισμό του σχηματισμού κλώνου. Τα διδεοξυνουκλεοτίδια στερούνται 3 'ΟΗ ομάδες για το σχηματισμό δεσμών φωσφοδιεστέρα με γειτονικό νουκλεοτίδιο. Ως εκ τούτου, ο σχηματισμός του κλώνου σταματά μόλις το ddNTP ενσωματωθεί στον πρόσφατα σχηματισμό κλώνου κατά τη διάρκεια της αλληλουχίας του ανασχηματισμού. Σε αυτή τη μέθοδο, πραγματοποιούνται τέσσερις ξεχωριστές αντιδράσεις σύνθεσης DNA (PCR) σε τέσσερις χωριστούς σωλήνες με έναν τύπο ddNTP. Άλλες απαιτήσεις παρέχονται επίσης για τους σωλήνες για PCR που περιλαμβάνουν εκκινητές, dNTPs, Taq πολυμεράση, ειδικές συνθήκες, κλπ. Τέσσερις ξεχωριστές αντιδράσεις πραγματοποιούνται σε τέσσερις σωλήνες με τέσσερα μίγματα. Μετά από αντιδράσεις PCR, τα προκύπτοντα θραύσματα DNA αποδιατάσσονται με θερμότητα και διαχωρίζονται με ηλεκτροφόρηση πηκτής. Στη συνέχεια, τα θραύσματα εμφανίζονται με τη χρήση είτε ενός επισημασμένου (ραδιενεργού ή φθορίζοντος) εκκινητή είτε dNTPs όπως φαίνεται στο σχήμα 02.
Εικόνα 02: Sanger Sequencing
Ποια είναι η διαφορά μεταξύ του Maxam Gilbert και του Sanger Sequencing;
- diff Άρθρο Μέσος Πριν από τον Πίνακα ->
Maxam Gilbert vs Sanger Sequencing
Η αλληλούχιση του Maxam Gilbert είναι η πρώτη τεχνική που αναπτύχθηκε για την αλληλούχιση του DNA. |
|
| Η μέθοδος προσδιορισμού αλληλουχίας Sanger εισήχθη μετά τη μέθοδο προσδιορισμού αλληλουχίας Maxam Gilbert. | Χρήση |
| Αυτή η μέθοδος σπάνια χρησιμοποιείται. | |
| Η αλληλούχιση Sanger χρησιμοποιείται συνήθως για τον προσδιορισμό της αλληλουχίας. | Χρήση επικίνδυνων χημικών ουσιών |
| Χρησιμοποιεί επικίνδυνα χημικά. | |
| Η χρήση επικίνδυνων χημικών ουσιών είναι περιορισμένη σε σύγκριση με τη μέθοδο Maxam Gilbert. | Επισήμανση για ανίχνευση |
| Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιεί ραδιενεργό P | |
| 32 για την επισήμανση των άκρων των θραυσμάτων DNA. Η αλληλούχιση του Sanger χρησιμοποιεί ραδιενεργά ή φθορίζοντα σημασμένα ddNTPs. | Περίληψη - Maxam Gilbert εναντίον Sanger Sequencing |
Η αλληλούχιση Maxam Gilbert και Sanger είναι δύο τύποι τεχνικών προσδιορισμού αλληλουχίας DNA που εμπίπτουν στην ανάλυση αλληλουχίας πρώτης γενεάς.Η αλληλούχιση του Maxam Gilbert είναι η πρώτη μέθοδος που εισήχθη για την αλληλούχιση του DNA το 1976 και εκτελείται με θραύση των θραυσμάτων DNA που έχουν επισημανθεί στο τέλος με βασικές χημικές ουσίες. Ως εκ τούτου, είναι γνωστό ως χημική αλληλούχιση. Η μέθοδος προσδιορισμού αλληλουχίας Sanger εισήχθη το 1977 και βασίζεται στις αντιδράσεις τερματισμού της αλυσίδας ddNTP. Η μέθοδος προσδιορισμού αλληλουχίας Sanger δημοφιλής από τη μέθοδο Maxam Gilbert οφείλεται στα διάφορα μειονεκτήματα της μεθόδου Maxam Gilbert όπως η υπερβολική κατανάλωση χρόνου, η χρήση επικίνδυνων χημικών ουσιών κλπ. Αυτή είναι η διαφορά μεταξύ της αλληλούχησης Maxam Gilbert και Sanger.
Αναφορές:
1. Maxam, Α. Μ., Και Walter Gilbert. "Μια νέα μέθοδος για την αλληλούχιση του DNA. "Πρακτικά της Εθνικής Ακαδημίας Επιστημών. National Acad Sciences, 9 Δεκεμβρίου 1976. Web. 30 Μαρτίου 2017
2. Heather, James M. και Benjamin Chain. "Η αλληλουχία των αλληλουχιών: Το ιστορικό της αλληλουχίας του DNA. "Γονιδιωματική. Academic Press, Ιανουάριος 2016. Ιστός. 30 Μαρτίου 2017
3. Τον Pareek, τον Chandra Shekhar, τον Rafal Smoczynski και τον Andrzej Tretyn. "Τεχνολογίες αλληλουχίας και αλληλούχιση γονιδιώματος. "Εφημερίδα της Εφαρμοσμένης Γενετικής. Springer-Verlag, Νοέμβριος 2011. Web. 30 Μαρτίου 2017
Ευγένεια εικόνας:
1. "Maxam gilbert sequencing" Πολλές φορές στην αγγλική Wikipedia (CC BY 3. 0) μέσω Wikimedia Commons
2. "Sanger-sequencing" Από Estevezj - Η δική σας δουλειά (CC BY-SA 3. 0) μέσω Wikimedia Commons
