Διαφορά μεταξύ φορέα κλωνοποίησης και φορέα έκφρασης: φορέας κλωνοποίησης ενάντια σε φορέα έκφρασης

Vector κλωνοποίησης εναντίον φορέα έκφρασης

Ο φορέας είναι ένας σημαντικός όρος στη μοριακή βιολογία. Στην ανασυνδυασμένη τεχνολογία, ο κύριος ρόλος ενός φορέα είναι να παρέχει έναν τρόπο μεταφοράς σε ένα χρήσιμο κλάσμα ϋΝΑ που πρόκειται να εισαχθεί σε ένα κύτταρο ξενιστή. Σύμφωνα με τον ορισμό, είναι ένα μόριο DNA που χρησιμοποιείται για να μεταφέρει ένα άλλο ξένο DNA τεχνητά σε ένα κύτταρο ξενιστή που πρόκειται να εκφραστεί ή να αναπαραχθεί. Οι περισσότεροι χρησιμοποιούμενοι φορείς είναι πλασμίδια, ιικοί φορείς, κοσμίδια και τεχνητά χρωμοσώματα. Ο φορέας κλωνοποίησης και ο φορέας έκφρασης είναι δύο τύποι διανυσμάτων που ταξινομούνται με βάση τις εφαρμογές τους.

Ο φορέας κλωνοποίησης είναι ένα κλάσμα του DNA, κυρίως ένας από τους αναφερόμενους φορείς, ο οποίος μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να εισαχθεί ένα ξένο μόριο ϋΝΑ και έχει την ικανότητα να εισάγεται σε έναν ξενιστή για σκοπούς κλωνοποίησης. Ένα ιδανικό χαρακτηριστικό ενός φορέα κλωνοποίησης είναι η εύκολη εισαγωγή και απομάκρυνση του θραύσματος ϋΝΑ με επεξεργασία ενζύμου περιορισμού και θεραπεία ενζύμου σύνδεσης. Για αυτό το μάθημα χρησιμοποιούνται συχνά πλασμίδια γενετικά τροποποιημένα.

Ο φορέας κλωνοποίησης πρέπει να έχει μια θέση πολλαπλής κλωνοποίησης, ένα επιλέξιμο γονίδιο δείκτη και ένα γονίδιο ανταποκριτή. Ο σκοπός μιας θέσης κλωνοποίησης είναι να δημιουργηθεί ένας χώρος για την κλωνοποίηση. Ένα επιλέξιμο γονίδιο δείκτη βοηθά στην αναγνώριση επιτυχημένων ανασυνδυασμένων μετά την κλωνοποίηση και ένα γονίδιο ανταποκριτή επιτρέπει τη διαλογή και ταυτοποιεί το σωστό ανασυνδυασμένο μεταξύ των ανασυνδυασμένων μετά την κλωνοποίηση. Ο φορέας κλωνοποίησης δεν βοηθά απαραιτήτως την έκφραση μιας πρωτεΐνης η οποία κωδικοποιεί το ξένο DNA. ο μόνος σκοπός του είναι να το μεταφέρει στον οικοδεσπότη.

Vector έκφρασης

Ο φορέας έκφρασης είναι επίσης γνωστός ως

κατασκευάσματος έκφρασης

. Αυτός ο φορέας χρησιμοποιείται ειδικά για την έκφραση πρωτεϊνών στο κύτταρο ξενιστή. Όπως οποιοσδήποτε φορέας, αυτό θα πρέπει επίσης να περιέχει τα κύρια μέρη μια πολλαπλή θέση κλωνοποίησης, ένα γονίδιο δείκτη και ένα γονίδιο αναφοράς. Ο φορέας εισάγει ένα νέο γονίδιο στον ξενιστή και χρησιμοποιώντας τον μηχανισμό σύνθεσης πρωτεΐνης του ξενιστή ο φορέας επιτρέπει στο γονίδιο να εκφράζεται στον ξενιστή. Η αρχική του εστίαση είναι να γίνει σταθερό m-RNA και έτσι να δημιουργηθούν πρωτεΐνες. Ένα καλό παράδειγμα είναι η εμπορική παραγωγή ινσουλίνης όπου το γονίδιο ινσουλίνης εισάγεται σε ένα βακτηριακό πλασμίδιο και εισάγεται πίσω σε ένα σώμα βακτηρίων Ε-coli επιτρέποντας στα πλασμίδια να πολλαπλασιάζονται και επιτρέποντας στην Ε-coli να αναπτύσσεται η έκκριση ινσουλίνης από την οποία συλλέγεται και χρησιμοποιείται. Για έναν φορέα που θα χρησιμοποιηθεί ως φορέας έκφρασης, θα πρέπει να έχει μια ισχυρή περιοχή προαγωγέα, μια σωστή αλληλουχία έναρξης μετάφρασης και ένα σωστό κωδικόνιο τερματισμού και μια αλληλουχία.Οι φορείς έκφρασης έχουν πολυάριθμες εφαρμογές στην παραγωγή πεπτιδίων και πρωτεϊνών για τη φαρμακευτική βιομηχανία όπως η παραγωγή ινσουλίνης, αυξητικής ορμόνης, αντιβιοτικών, εμβολίων, αντισωμάτων. Χρησιμοποιείται επίσης για την παραγωγή ενζύμων που σχετίζονται με τις βιομηχανίες τροφίμων και ενδυμάτων. Οι φορείς έκφρασης χρησιμοποιούνται επίσης για την παραγωγή διαγονιδιακών φυτών, όπως χρυσό ρύζι, ανθεκτικά στα έντομα φυτά. Ποια είναι η διαφορά μεταξύ ενός διανύσματος κλωνοποίησης και ενός φορέα έκφρασης;

• Χρησιμοποιείται ένας φορέας κλωνοποίησης για την εισαγωγή ενός ξένου θραύσματος DNA σε έναν ξενιστή και δεν εκφράζει απαραιτήτως το γονίδιο στον ξενιστή

. Αλλά, οι φορείς έκφρασης χρησιμοποιούνται για να εκφράσουν το εισαγόμενο γονίδιο παράγοντας την σχετική πρωτεΐνη.