Διαφορά μεταξύ της βενζονάσης και της ϋΝάσης | Βενζόναση έναντι DNase

Διαφορά - Benzonase vs. DNase

Η αποικοδόμηση των νουκλεϊνικών οξέων είναι σημαντική για πολλές τεχνικές μοριακής βιολογίας. Χρησιμοποιείται ευρέως σε τεχνολογία ανασυνδυασμένου DNA για να απαλλαγούμε από ανεπιθύμητα θραύσματα DNA και RNA. Τα ένζυμα αποικοδόμησης νουκλεϊκού οξέος αναφέρονται ως Νουκλεάσες και μπορούν να είναι διαφορετικού τύπου με βάση την απαιτούμενη λειτουργία. Οι νουκλεάσες που υποβαθμίζουν το DNA είναι γνωστές ως DNases, ενώ εκείνες που αποικοδομούν το RNA είναι γνωστές RNases. Αυτά τα ένζυμα χρησιμοποιούνται κυρίως σε πειράματα in vitro όπου διεξάγονται μοριακές δοκιμές σε vitro για την απομόνωση καθαρού DNA, RNA ή πρωτεϊνών. Οι βενζονάσες είναι ένας τύπος νουκλεασών που αποικοδομούν τόσο το DNA όσο και το RNA, ενώ οι ϋΝΑσες αποικοδομούν μόνο το DNA. Αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ της Benzonase και της DNase.

ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΑ

1. Επισκόπηση και διαφορά κλειδιού

2. Τι είναι η βενζονάση

3. Τι είναι η DNase

4. Ομοιότητες μεταξύ της βενζοζάσης και της ϋΝάσης

5. Συγκριτική παράσταση - Benzonase vs. DNase σε μορφή πίνακα

6. Περίληψη

Τι είναι η βενζονάση;

Η βενζονάση είναι μια γενετικά τροποποιημένη ενδονουκλεάση από Serratia marcescens. Αυτό το ένζυμο παράγεται σε Ε. coli φιλοξενεί σε βιομηχανική κλίμακα. Η βενζονάση είναι ικανή να διασπά το δίκλωνο DNA, το γραμμικό DNA, το κυκλικό DNA και το μονόκλωνο RNA. Έτσι, η βενζόνη είναι εμπορικά σημαντική. Το ένζυμο βενζονάσης είναι ένα διμερές πρωτεΐνης το οποίο έχει 245 όμοια αμινοξέα, υπομονάδες ~ 30 kDa με δύο βασικούς δεσμούς δισουλφιδίου. Η βενζονάση διασπά τα νουκλεϊκά οξέα στο 5 'άκρο της και οδηγεί σε θραύσματα με ελεύθερα 5' άκρα. Η βενζονάση μπορεί να διασπάσει νουκλεϊνικά οξέα σε οποιαδήποτε αλληλουχία αλλά προτιμά τις πλούσιες σε GC περιοχές.

Η βενζονάση αποθηκεύεται στους -20 ⁰ C. Το βέλτιστο ρΗ για τη δραστικότητα ενζύμου βρέθηκε να είναι 8. 0 - 9. 2. Οι εφαρμογές βενζονασης περιλαμβάνουν προετοιμασία δείγματος για ηλεκτροφόρηση πηκτής πρωτεΐνης 2D όπου η βενζονάση αφαιρεί δεσμευμένα νουκλεϊνικά οξέα και απομάκρυνση μολυσματικών νουκλεϊνικών οξέων από παρασκευάσματα ανασυνδυασμένης πρωτεΐνης. Χρησιμοποιείται επίσης για τη μείωση του ιξώδους των πρωτεϊνικών εκχυλισμάτων και την πρόληψη της συσσώρευσης των κυττάρων σε ένα μείγμα κυττάρων.

Τι είναι η DNase;

Η ϋΝάση είναι ένα νουκλεάση, υδρολυτικό ένζυμο που είναι μόνο ικανό να διασπά το δίκλωνο DNA. Υπάρχουν δύο κύριοι τύποι DNases: DNase I και DNase II. Η ϋΝάση Ι συμμετέχει στη διάσπαση του δίκλωνου ϋΝΑ για την παραγωγή πολυνουκλεοτιδίων με ελεύθερα άκρα 5 '. Η ϋΝάση II εμπλέκεται στην διάσπαση του δίκλωνου ϋΝΑ για να παράγει πολυνουκλεοτιδικούς κλώνους με 3 'ελεύθερα άκρα ή προεξοχές.Η δραστικότητα του ενζύμου εξαρτάται από πολλούς ιοντικούς συμπαράγοντες που περιλαμβάνουν Ca

2+

, Mg ² DNase I ⁺ ή Mn ²⁺ . Η δραστικότητα Mg ²⁺ και Mn ²⁺ αποφασίζει τη λειτουργία της DNase Ι. Παρουσία Mg ²⁺ , η ϋΝάση Ι διασπά κάθε κλώνο dsDNA ανεξάρτητα. Αυτό γίνεται με τυχαίο τρόπο. Αντιθέτως, παρουσία Mn ^2+, , το ένζυμο διασπά τις δύο ίνες DNA περίπου στην ίδια θέση. Αυτή η διάσπαση θα οδηγήσει στην παραγωγή δύο τύπων θραυσμάτων DNA. έναν τύπο με αμβλύ άκρα και έναν άλλο τύπο με μία ή δύο προεξοχές νουκλεοτιδίων.

Εικόνα 02: DNase

DNase II

Η ϋΝάση II λειτουργεί σε βέλτιστο pH 4. 5-5. 0 και ιόντα δισθενών μετάλλων απαιτούνται για τη δραστικότητά τους, παρόμοια με την ϋΝάση Ι. Ο μηχανισμός της ϋΝάσης II είναι γνωστός ότι αποτελείται από τρία κύρια στάδια.

1. Πολλαπλές θραύσεις μονής έλικας προκαλούνται μέσα στην ραχοκοκαλιά του DNA.
2. Παράγονται διαλυτά σε οξύ νουκλεοτίδια και ολιγονουκλεοτίδια.
3. Η μη γραμμική υπερχρωμική μετατόπιση εμφανίζεται στην τελευταία φάση.

Οι κύριοι αναστολείς του ενζύμου ϋΝάσης περιλαμβάνουν χηλικούς παράγοντες μετάλλων, μεταβατικά μέταλλα και χημικές ουσίες όπως δωδεκυλοθειικό νάτριο και β-μερκαπτοαιθανόλη.

Οι κυριότερες εφαρμογές της ϋΝάσης περιλαμβάνουν την παρασκευή εκχυλισμάτων RNA χωρίς DNA και πρωτεϊνικών εκχυλισμάτων και την απομάκρυνση του εκμαγείου ϋΝΑ κατά τη διάρκεια των in vitro μεταγραφικών πειραμάτων.

Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ της βενζονάσης και της ϋΝάσης;

• Και τα δύο είναι υδρολυτικά ένζυμα.
• Και οι δύο είναι νουκλεάσες.
• Και οι δύο συμμετέχουν με διάσπαση των φωσφοδιεστερικών δεσμών των νουκλεϊνικών οξέων.
• Και οι δύο απαιτούν βέλτιστο ρΗ και θερμοκρασίες αποθήκευσης για τη διατήρηση της δραστηριότητας του ενζύμου.
• Οι αναστολείς των ενζύμων περιλαμβάνουν χηλικούς παράγοντες, μέταλλα μετάβασης και χημικά απορρυπαντικά.
• Οι εφαρμογές επικεντρώνονται κυρίως στη λήψη εκχυλισμάτων υψηλής καθαρότητας DNA, RNA και πρωτεϊνών.
• Και τα δύο ένζυμα μπορούν να παραχθούν μέσω γενετικής μηχανικής.

Ποια είναι η διαφορά ανάμεσα στη βενζονάση και την DNase;

- diff Άρθρο Μέση πριν από τον πίνακα ->

Benzonase vs DNase
Η βενζονάση είναι ένα ένζυμο ικανό να διασπά το δίκλωνο DNA, το γραμμικό DNA, το κυκλικό DNA και το RNA.	Η ϋΝάση είναι ένα ένζυμο ικανό να διασπά το δίκλωνο DNA.
Υπόστρωμα για το ένζυμο
Και το DNA και το RNA είναι υποστρώματα για τη βενζονάση.	Το DNA είναι το υπόστρωμα για την DNase.
Δομή
Η βέλτιστη περιοχή pH της Benzonase είναι 7. 0-8. 0	Βέλτιστες περιοχές ρΗ της ϋΝάσης Ι είναι 7. 0 - 8. 0 και η ϋζάση II είναι 4. 5 - 5. 0

Περίληψη - Βενζονάση έναντι ϋΝάσης

Τα ένζυμα νουκλεάσης χρησιμοποιούνται ευρέως σε διάφορες πειραματικές διαδικασίες όσον αφορά τη μοριακή βιολογία και τη γενετική μηχανική. Η βενζονάση και η ϋΝάση είναι δύο τύποι νουκλεασών. Η βενζονάση εμπλέκεται στην αποικοδόμηση τόσο του DNA όσο και του RNA, ενώ η ϋΝάση εμπλέκεται στη διάσπαση του δίκλωνου DNA. Αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ βενζονάσης και ϋΝάσης. Προς το παρόν, αμφότεροι αυτοί οι τύποι νουκλεάσης παράγονται μέσω τεχνολογίας ανασυνδυασμένου DNA που αποδίδει ένζυμα υψηλότερης ποιότητας που βελτιστοποιούνται για μέγιστη παραγωγή.

Λήψη PDF Έκδοσης Benzonase vs DNase

Μπορείτε να κατεβάσετε την έκδοση PDF αυτού του άρθρου και να το χρησιμοποιήσετε για σκοπούς εκτός σύνδεσης σύμφωνα με την παραπομπή. Κάντε λήψη της έκδοσης PDF εδώ Διαφορά μεταξύ Benzonase και DNase

Αναφορές:

1. "Δεοξυριβονουκλεάση Ι από βόειο πάγκρεας D5025. "Sigma-Aldrich, διαθέσιμο εδώ. Έγινε πρόσβαση στις 19 Σεπτεμβρίου 2017.

2. "Δεοξυριβονουκλεάση II. "Δεοξυριβονουκλεάση II - Εγχειρίδιο ενζύμου Worthington, διαθέσιμο εδώ. Έγινε πρόσβαση στις 19 Σεπτεμβρίου 2017.

Ευγένεια εικόνας:

1. "Υπερευαίσθητη θέση DNAse" Από τους Wang Υ-Μ, Zhou Ρ, Wang L-Υ, Li Ζ-Η, Zhang Υ-Ν, et αϊ. - Wang Y-Μ, Zhou Ρ, Wang L-Υ, Li Ζ-Η, Zhang Υ-Ν, et αϊ. (2012) Συσχέτιση μεταξύ της κατανομής υπερευαισθησίας της θέσης DNase και της έκφρασης γονιδίων σε κύτταρα HeLa S3. PLoS ONE 7 (8): e42414. doi: 10. 1371 / περιοδικό. άρτος αραβοσίτου. 0042414 (CC BY-SA 2. 5) μέσω Wikimedia Commons