Διαφορά μεταξύ σελίδας SDS και κηλίδας Western | SDS Page vs Western Blot

Διαφορά κλειδιού - σελίδα SDS vs Western Blot

Το Western blotting είναι μια τεχνική που ανιχνεύει μια συγκεκριμένη πρωτεΐνη από ένα δείγμα πρωτεϊνών. Αυτή η τεχνική εκτελείται μέσω πολλών βασικών βημάτων: ηλεκτροφόρηση πηκτής, κηλίδωση και υβριδισμός. Η ηλεκτροφόρηση πηκτής δωδεκυλ θειικού πολυακρυλαμιδίου (σελίδα SDS) είναι ένα είδος τεχνικής ηλεκτροφόρησης πηκτής που χρησιμοποιείται για τη διαίρεση πρωτεϊνών ανάλογα με τα μεγέθη τους (μοριακά βάρη). Το στύπωμα Western είναι ένα ειδικό φύλλο μίας μεμβράνης στυπώματος που χρησιμοποιείται για τη μεταφορά του ίδιου μοτίβου των πρωτεϊνών στη σελίδα SDS. Η βασική διαφορά μεταξύ σελίδας SDS και στυπώματος western είναι ότι Η σελίδα SDS επιτρέπει τον διαχωρισμό των πρωτεϊνών σε ένα μείγμα ενώ το στύπωμα Western επιτρέπει την ανίχνευση και την ποσοτικοποίηση μιας συγκεκριμένης πρωτεΐνης από ένα μείγμα. Και οι δύο είναι χρήσιμες σε μελέτες ανάλυσης πρωτεϊνών.

ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΑ

1. Επισκόπηση και διαφορά κλειδιού

2. Τι είναι η σελίδα SDS

3. Τι είναι το Western Blot

4. Σύγκριση δίπλα-δίπλα - Σελίδα SDS vs Western Blot

5. Περίληψη

Τι είναι η Σελίδα SDS;

Η σελίδα SDS είναι μια τεχνική ηλεκτροφόρησης πηκτής που χρησιμοποιείται για τον διαχωρισμό πρωτεϊνών. Χρησιμοποιείται συνήθως στη βιοχημεία, τη γενετική, την εγκληματολογία και τη μοριακή βιολογία. Αφού οι πρωτεΐνες εκχυλίζονται από το δείγμα, αυτές εκτελούνται σε ένα πήκτωμα αποτελούμενο από SDS και πολυακρυλαμίδιο. Το SDS είναι ένα ανιονικό απορρυπαντικό το οποίο χρησιμοποιείται για τη γραμμικοποίηση των πρωτεϊνών (μετουσιωτικές πρωτεΐνες) και για να προσδώσει ένα αρνητικό φορτίο στις γραμμικοποιημένες πρωτεΐνες ανάλογα με τη μοριακή τους μάζα. Το πολυακρυλαμίδιο γίνεται το στερεό υπόστρωμα για το πήκτωμα. Οι μετουσιωμένες πρωτεΐνες που είναι αρνητικά φορτισμένες μεταναστεύουν προς το θετικό άκρο της συσκευής διαμέσου του πηκτώματος. Σύμφωνα με τα μεγέθη των πρωτεϊνών, οι μεταναστευτικές ταχύτητες διαφέρουν μεταξύ των πρωτεϊνών και συμβαίνει ο διαχωρισμός. Επομένως, η σελίδα SDS είναι χρήσιμη για τον διαχωρισμό μεμονωμένων πρωτεϊνών με βάση τα μεγέθη τους.

Η παρασκευή του πηκτώματος πολυακρυλαμιδίου για την κλασμάτωση πρωτεϊνών είναι ένα κρίσιμο βήμα στην SDS Page. Η σωστή συγκέντρωση πολυακρυλαμιδίου και ο τύπος του παράγοντα σταυρωτής σύνδεσης που χρησιμοποιείται ισχυρά επηρεάζουν τις φυσικές ιδιότητες του πηκτώματος, πράγμα που καθιστά τον πραγματικό διαχωρισμό των διαφόρων πρωτεϊνών. Τα μεγέθη πόρων του πηκτώματος πρέπει να διαχειρίζονται σωστά για αποτελεσματικό διαχωρισμό. Ωστόσο, η σελίδα SDS θεωρείται ως τεχνική διαχωρισμού πρωτεϊνών υψηλής ανάλυσης.

Η τεχνική σελίδας SDS έχει σημαντικό περιορισμό στην ανάλυση πρωτεϊνών. Δεδομένου ότι το SDS μετουσιώνει τις πρωτεΐνες πριν από τον διαχωρισμό, δεν επιτρέπει την ανίχνευση της ενζυμικής δραστηριότητας, αλληλεπιδράσεις δέσμευσης πρωτεϊνών, συμπαράγοντες πρωτεϊνών κλπ.

Εικόνα 01: Σελίδα SDS

Τι είναι το Western Blot;

Η τεχνική Western blotting επιτρέπει την ανίχνευση μιας συγκεκριμένης πρωτεΐνης από ένα μίγμα πρωτεϊνών και τη μέτρηση της ποσότητας και του μοριακού βάρους της πρωτεΐνης. Το στύπωμα Western είναι η μεμβράνη που χρησιμοποιήθηκε κατά τη διάρκεια της διαδικασίας στυπώματος για να ληφθεί η εικόνα καθρέφτη των μοτίβων πρωτεΐνης στην πηκτή πολυακρυλαμιδίου SDS. Η μεμβράνη που χρησιμοποιείται για στύπωση western αποτελείται κυρίως από νιτροκυτταρίνη ή διφθοριούχο πολυβινυλιδένιο (PVDF). Η μεμβράνη με την μεταφερόμενη πρωτεΐνη μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να αναγνωρίσει την επιθυμητή πρωτεΐνη. Απαιτεί υψηλής ποιότητας αντίσωμα για την ανίχνευση της επιθυμητής πρωτεΐνης με υβριδισμό. Το αντίσωμα συνδέεται με το ειδικό αντιγόνο του και αποκαλύπτει την παρουσία του επιθυμητού αντιγόνου που είναι πρωτεΐνη.

Η μεταφορά των πρωτεϊνών από την πηκτή πολυακρυλαμιδίου SDS στο στύπωμα Western διεξάγεται με ηλεκτροσόπα. Είναι μια αποτελεσματική και γρήγορη μέθοδος η οποία προκαλεί τις πρωτεΐνες να ηλεκτροφορήσουν έξω από το πήκτωμα και να περάσουν πάνω στη μεμβράνη νιτροκυτταρίνης (κηλίδα Western).

Εικόνα 02: Western Blot

Ποια είναι η διαφορά μεταξύ της Σελίδας SDS και του Western Blot;

- diff Άρθρο Μέση πριν από τον πίνακα ->

Σελίδα SDS vs Western Blot

Η σελίδα SDS είναι μια τεχνική ηλεκτροφόρησης πηκτής.
Το στύπωμα Western είναι μια τεχνική που εκτελείται σε μια μεμβράνη για την ανίχνευση μιας συγκεκριμένης πρωτεΐνης από ένα μείγμα.	Χρησιμοποιήστε τη σελίδα
Η σελίδα SDS επιτρέπει τον διαχωρισμό των πρωτεϊνών ανάλογα με τα μεγέθη τους.
Το Western blot επιτρέπει τη μεταφορά πρωτεϊνών στη γέλη σελίδας SDS χωρίς να αλλάζει το πρότυπο και επιτρέπει την υβριδοποίηση με συγκεκριμένα αντισώματα.	Μειονεκτήματα
Η μετουσίωση των πρωτεϊνών, το υψηλό κόστος και η παρουσία χημικών νευροτοξινών είναι τα μειονεκτήματα αυτής της τεχνικής.
Αυτή η τεχνική είναι χρονοβόρα και απαιτεί καλές προσωπικές και ειδικές ελεγχόμενες συνθήκες.	Περίληψη - Σελίδα SDS vs Western Blot

Η σελίδα SDS και η κηλίδα Western είναι δύο μέθοδοι που εμπλέκονται στην ανάλυση πρωτεϊνών. Η σελίδα SDS επιτρέπει τον εύκολο διαχωρισμό των πρωτεϊνών σε ένα πήκτωμα σύμφωνα με το μοριακό τους βάρος. Το στύπωμα Western βοηθά στην επιβεβαίωση της παρουσίας και της ποσότητας μιας συγκεκριμένης πρωτεΐνης μέσω υβριδισμού με ειδικά αντισώματα. Αυτή είναι η διαφορά μεταξύ σελίδας SDS και στυπώματος western.

Αναφορές:

1. Blancher, C., και Α. Jones. "Τεχνικές SDS-PAGE και Western Blotting Techniques. "Μέθοδοι στη μοριακή ιατρική. Εθνική Βιβλιοθήκη Ιατρικής του Η.Π.Α., n. ρε. Ιστός. 27 Μαρτίου 2017

2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig και David H. Petering. "Φυσική SDS-PAGE: Ηλεκτροφορητικός διαχωρισμός πρωτεϊνών υψηλής ανάλυσης με συγκράτηση φυσικών ιδιοτήτων συμπεριλαμβανομένων των δεσμευμένων μεταλλικών ιόντων. "Metallomics: ολοκληρωμένη βιομετρική επιστήμη. Εθνική Βιβλιοθήκη Ιατρικής του Ηνωμένου Βασιλείου, Μάιος 2014. Web. 27 Μαρτίου 2017.

Ευγένεια εικόνας:

1. "Ηλεκτροφόρηση SDS-PAGE" Από το Bensaccount στην αγγλική Wikipedia (CC BY 3. 0) μέσω Wikimedia Commons

2. "Western Blot 114A" Από την Amanthabagdon - Ίδια εργασία (δημόσιος τομέας) μέσω Wikimedia Commons