Διαφορά μεταξύ κλωνοποίησης και υποκλωνοποίησης | Κλωνοποίηση Vs. Υποκλωνοποίηση

Η κλωνοποίηση και η υποκλωνοποίηση είναι διαδικασίες μοριακής βιολογίας που δημιουργούν γενετικά ταυτόσημα κύτταρα ή οργανισμούς που φέρουν το DNA ή το γονίδιο που παρουσιάζουν ενδιαφέρον. Η κλωνοποίηση είναι μια τεχνική που περιλαμβάνει την εισαγωγή του ενδιαφερομένου γονιδίου ή ϋΝΑ σε ένα φορέα, την αντιγραφή του εντός ενός βακτηρίου ξενιστή και την παραγωγή κυττάρων ή οργανισμών που είναι ακριβή αντίγραφα της γενετικής σύνθεσης. Η υποκλωνοποίηση είναι μια τεχνική που περιλαμβάνει την εισαγωγή του γονιδίου που ενδιαφέρει, το οποίο έχει ήδη εισαχθεί σε ένα φορέα, σε ένα δευτερεύοντα φορέα, την αναπαραγωγή του εντός ενός βακτηρίου ξενιστή και την παραγωγή γενετικά πανομοιότυπων αντιγράφων κυττάρων ή οργανισμών. Η βασική διαφορά μεταξύ της κλωνοποίησης και της υποκλωνοποίησης είναι ότι, κατά την κλωνοποίηση, το γονίδιο που ενδιαφέρει, μόλις απολινωθεί σε ένα φορέα, συνεχίζει τη διαδικασία κλωνοποίησης ενώ, στην υποκλωνοποίηση, το ήδη κλωνοποιημένο γονίδιο ενδιαφέροντος διαχωρίζεται από τον γονικό φορέα εισάγεται και πάλι σε ένα φορέα παραλήπτη και συνεχίζει τη διαδικασία

. ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΑ

1. Επισκόπηση και διαφορά κλειδιού

2. Τι είναι η Κλωνοποίηση

3. Τι είναι η Υποκλωνοποίηση

4. Σύγκριση μεταξύ τους - Κλωνοποίηση vs. Υποκλωνοποίηση

5. Περίληψη

Τι είναι η Κλωνοποίηση;

Η κλωνοποίηση είναι η διαδικασία που παράγει γενετικά ταυτόσημους οργανισμούς ή κύτταρα. Στη φύση, η κλωνοποίηση συμβαίνει στα μέσα ασεξουαλικής αναπαραγωγής. Όταν δεν υπάρχει γενετικός ανασυνδυασμός ή αλλοίωση, τα θυγατρικά κύτταρα λαμβάνουν την ίδια γενετική σύνθεση του γονέα. Οι προκαρυωτικοί και ευκαρυωτικοί οργανισμοί δημιουργούν κλώνους με δυαδική σχάση, εκβλάστηση, μίτωση κλπ. Στη μοριακή βιολογία, τα γονίδια κλωνοποίησης ή τα συγκεκριμένα θραύσματα του DNA είναι μια δημοφιλής μέθοδος για τη μελέτη της δομής και της λειτουργίας αυτού του συγκεκριμένου τμήματος ϋΝΑ.

Ο κύριος στόχος της μοριακής κλωνοποίησης είναι να κάνει εκατομμύρια αντίγραφα γενετικά πανομοιότυπων κυττάρων ή οργανισμών που φέρουν το θραύσμα DNA που ενδιαφέρει (κυρίως γονίδια). Δημιουργεί οργανισμούς με ακριβή γενετικά αντίγραφα άλλου. Πρωτίστως, συγκεκριμένα γονίδια κλωνοποιούνται σε μοριακές μελέτες για να ληφθούν δομικές και λειτουργικές πληροφορίες και για αλληλούχιση DNA. Επίσης, για την παραγωγή συγκεκριμένων πρωτεϊνών ή προϊόντων σε μεγάλη κλίμακα, η κλωνοποίηση χρησιμοποιείται ευρέως.

Διαδικασία κλωνοποίησης

Τα βασικά βήματα της διαδικασίας κλωνοποίησης έχουν ως εξής.

Ταυτοποίηση και απομόνωση του γονιδίου ενδιαφέροντος. (Ενίσχυση του γονιδίου ενδιαφέροντος με PCR).

Περιοριστική πέψη του γονιδίου ενδιαφέροντος (Η ενδονουκλεάση περιορισμού κόβει το γονίδιο).

Περιορισμός πέψης του φορέα DNA.(Το DNA του φορέα κόβεται επίσης χρησιμοποιώντας την ίδια ενδονουκλεάση περιορισμού).

1. Εισαγωγή του γονιδίου στον φορέα και σχηματισμός του ανασυνδυασμένου μορίου.
2. Μετασχηματισμός του ανασυνδυασμένου φορέα σε ένα βακτηρίδιο ξενιστή.
3. Η απομόνωση και η ταυτοποίηση των μετασχηματισμένων βακτηρίων (ο πλασμιδικός φορέας θα πρέπει να περιέχει ένα επιλέξιμο γονίδιο, συνηθέστερα ένα γονίδιο ανθεκτικότητας στα αντιβιοτικά για τη διαλογή μετασχηματισμένων βακτηριδίων).
4. Ανασυνδυασμένη έκφραση γονιδίου εντός του ξενιστή.
5. Εικόνα_01: Διαδικασία κλωνοποίησης
6. Τι είναι η υποκλωνοποίηση;
7. Η υποκλωνοποίηση είναι μια διαδικασία μετακίνησης ενός γονιδίου που ενδιαφέρει από ένα φορέα σε άλλο φορέα για να δείτε την έκφραση του γονιδίου για να αποκτήσετε την επιθυμητή λειτουργικότητα του γονιδίου. Στη μέθοδο αυτή εμπλέκονται δύο φορείς. δηλαδή, γονικό διάνυσμα και φορέα προορισμού. Τα κλωνοποιημένα ένθετα μετακινούνται πάλι σε ένα δεύτερο φορέα σε υποκλωνοποίηση. Ο στόχος της μεταφοράς του γονιδίου από τον πρώτο φορέα στον δεύτερο φορέα είναι να ληφθεί κάτι που δεν θα μπορούσε να γίνει από τον πρώτο φορέα ή να διαχωριστεί ξανά ένα γονίδιο μέσα στο ήδη κλωνοποιημένο θραύσμα του DNA και να το εκφράσει μόνο του. Τα ένζυμα περιορισμού χρησιμοποιούνται στην αρχή αυτής της διαδικασίας.

Διαδικασία υποκλωνοποίησης

Τα βασικά βήματα της υποκλωνοποίησης είναι τα εξής.

Με τη βοήθεια περιοριστικών ενδονουκλεασών, διαχωρισμός του ενδιαφέροντος ϋΝΑ στο πλασμίδιο δότη (γονικό φορέα).

Ενίσχυση του ενδιαφέροντος DNA με PCR.

Καθαρισμός του προϊόντος PCR (ϋΝΑ ενδιαφέροντος) με ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα.

1. Άνοιγμα του πλασμιδίου παραλήπτη με ίδιες ενδονουκλεάσες περιορισμού που χρησιμοποιήθηκαν για διαχωρισμό του ενδιαφέροντος DNA στο γονικό πλασμίδιο.
2. Σύνδεση του ενδιαφέροντος DNA (γονίδιο) στο πλασμίδιο-δέκτη για να δημιουργηθεί το υποκλωνοποιημένο πλασμίδιο.
3. Μετασχηματισμός του υποκλωνομένου φορέα σε ένα ικανό βακτηρίδιο ξενιστή.
4. Διαλογή μετασχηματισμένων κυττάρων.
5. Καθαρισμός του ϋΝΑ πλασμιδίου και χρήση για αλληλούχιση DNA ή έκφραση των γονιδίων για να ληφθούν τα επιθυμητά προϊόντα.
6. Η υποκλωνοποίηση πραγματοποιείται σε περιπτώσεις απομόνωσης ενός γονιδίου από την κλωνοποιημένη ομάδα γονιδίων ή όταν το γονίδιο ενδιαφέροντος απαιτείται να μεταφερθεί σε ένα χρήσιμο πλασμίδιο για να δει την ακριβή λειτουργία του γονιδίου ενδιαφέροντος.
7. Figure_02: Διαδικασία υποκλωνοποίησης
8. Ποια είναι η διαφορά μεταξύ κλωνοποίησης και υποκλωνοποίησης;

- diff Άρθρο Μέση πριν από τον πίνακα ->

Κλωνοποίηση vs Υποκλωνοποίηση

Η κλωνοποίηση είναι η διαδικασία που παράγει γενετικά ταυτόσημους οργανισμούς ή κύτταρα.

Η υποκλωνοποίηση είναι μια διαδικασία μετακίνησης ενός γονιδίου που ενδιαφέρει από ένα φορέα σε άλλο φορέα για να δείτε την έκφραση του γονιδίου για να αποκτήσετε την επιθυμητή λειτουργικότητα του γονιδίου.

Διαδικασία
Διαχωρίστε το ενδιαφέρον DNA από τον οργανισμό και εισάγετε σε έναν φορέα μία φορά και κλωνοποιήστε	. Το ήδη κλωνοποιημένο DNA διαχωρίζεται από τον πρώτο φορέα και εισάγεται σε δεύτερο φορέα και κλωνοποιείται.
Εισαγωγή κίνησης μέσω διανυσμάτων
Δεν μετακινεί ένθετα (DNA που ενδιαφέρει) από ένα διάνυσμα σε άλλο φορέα.	Μετακινήστε τα ένθετα από το γονικό διάνυσμα στο διάνυσμα προορισμού.
Περίληψη - Κλωνοποίηση vs. Υποκλωνοποίηση
Η κλωνοποίηση δημιουργεί γενετικά όμοια κύτταρα ή οργανισμούς με το εισαχθέν γονίδιο ή ϋΝΑ ενδιαφέροντος.Προχωρά μέσω του διαχωρισμού και της εισαγωγής του ενδιαφέροντος ϋΝΑ σε φορέα και έκφρασης εντός ενός βακτηρίου ξενιστή. Η υποκλωνοποίηση μοιράζεται παρόμοια βήματα με την κλωνοποίηση. Ωστόσο, στην υποκλωνοποίηση, ήδη κλωνοποιημένο θραύσμα ϋΝΑ (γονίδιο ενδιαφέροντος) εισάγεται σε φορέα και μετασχηματίζεται σε ξενιστή βακτήριο. Αυτή είναι η βασική διαφορά μεταξύ της κλωνοποίησης και της υποκλωνοποίησης.	Αναφορές

Lodish, Harvey. "Κλωνοποίηση DNA με φορείς πλασμιδίων. "Μοριακή κυτταρική βιολογία. 4η έκδοση. Η Εθνική Βιβλιοθήκη Ιατρικής του Ηνωμένου Βασιλείου, 01 Ιανουαρίου 1970. Web. 05 Μαρτίου 2017

"Υποκλωνοποίηση. "Wikipedia. Ίδρυμα Wikimedia, 14 Φεβρουαρίου 2017. Ιστός. 06 Μαρτίου 2017

"Υποκλωνοποίηση. "Υποκλωνοποίηση | Άρθρα ανοικτής πρόσβασης Περιοδικά ανοικτής πρόσβασης | Πρακτικά συνεδρίου | Συντάκτες | Συγγραφείς | Αναθεωρητές | επιστημονικά γεγονότα. Ν. Ρ., n. ρε. Ιστός. 06 Μαρτίου 2017

1. Wackerhage, Henning. "Πώς να υποκλωνοποιήσετε. "Πώς να υποκλωνοποιήσετε. Ν. Ρ., 01 Ιανουαρίου 1970. Web. 06 Μαρτίου 2017
2. Ευγενική παραπομπή
3. Διαδικασία μοριακής κλωνοποίησης - Από το CNX OpenStax [CC BY 4. 0], μέσω του Wikimedia Commons
4. Διαδικασία υποκλωνοποίησης - Από Ο αρχικός χρήστης ήταν το Takometer στα Αγγλικά Wikipedia (Transferred from en. wikipedia to Commons.) [CC BY 2.5], μέσω του Wikimedia Commons